时间相关单光子计数(Time Corelated Single Photon Counting, TCSPC) 以单光子的灵敏度、高信噪比的特点成为荧光寿命测试中一种非常重要的时域测试技术。TCSPC的电子部分可以看作快速秒表，这个秒表被来自光源的START信号触发后开始计时，而被检测器接收到的STOP信号脉冲终止计时。START和STOP之间的时间差，即为样品受激后发出的第一个光子与激发光之间的时间差。最终显示在柱状图上的计数相对时间的函数实际上就代表了荧光强度相对时间变化的曲线，即荧光寿命衰减曲线。

TCSPC测试原理图

卓立汉光推出全新⼀代⾼精度时间相关单光⼦计数TCSPC Plus数采系统DCS900PC-G2，实现低⾄2ps的时间分辨率，同时死时间降低⾄2ns，计时抖动＜10ps，可⽀持⾼达500Mcps的瞬时饱和计数率。该数采卡使用在OmniFluo990稳态瞬态荧光光谱仪以及OmniFluo-FLIM 荧光寿命成像显微镜上，与皮秒脉冲激光器联用时，寿命测试下限可达100ps，可为分子内部快速动力学过程的探索，提供有利的研究工具。

实测案例

TCSPC Plus在低至100ps的短荧光寿命测试中表现出色，甚至对于荧光寿命略低于100ps的样品，我们同样得到了准确性高，可与文献媲美的测试效果。以下为相关测试案例。

样品为赤藓红B (Erythrosin B)水溶液，激发光源采用超连续白光激光器，频率设置为10M。激发波长为500nm。发射侧单色器带宽为0.8nm，检测器为R928P光电倍增管，探测波长为555nm。TCSPC时间分辨率为2ps，延时44ns。

水中赤藓红B荧光寿命测试

经过Omni-Win软件拟合可以得到水中Erythrosin B的寿命为88ps，与文献报道值几乎一致【1,2】。以下荧光标准物质的寿命测试对照表【1】，出自于由九个科研团队共同参与的一个国际合作项目，从表中可以看到，赤藓红B在水溶液中的寿命参考值为89±3ps。

荧光标准物的寿命测试对照表

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参考文献

【1】 Fluorescence Lifetime Standards for Time and Frequency Domain Fluorescence Spectroscopy. Anal. Chem. 2007, 79, 2137-2149

【2】 Measuring and Sorting Cell Populations Expressing Isospectral Fluorescent Proteins with Different Fluorescence Lifetimes. PLoS ONE 9(10): e109940.